El tiempo de ensayo se reduce considerablemente de aproximadamente una hora a unos pocos minutos con el método RTF-EXPAR recientemente informado que utiliza un enfoque libre de transcriptasa inversa (RTF) para la conversión de ARN en ADN seguido de EXPAR (reacción de amplificación exponencial) para la amplificación a una sola temperatura. .
Controlar la tasa de propagación de COVID-19 requiere una estrategia de prueba de virus precisa y más rápida. RT-PCR (reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa), el método de prueba más preciso que se emplea actualmente es una prueba de dos pasos que toma alrededor de 60 minutos por muestra.
Los investigadores de la Universidad de Birmingham han informado sobre un método novedoso para la detección del SARS-CoV-2. Esto podría permitir pruebas mucho más rápidas y es suficientemente sensible.
La detección de ARN viral por RT-PCR (reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa) implica la conversión del ARN viral en ADN complementario (ADNc) seguido de la amplificación del ADNc mediante una PCR cuantitativa (qPCR). A continuación, se detecta el ADNc usando un tinte fluorescente. Esto demora hasta una hora.
El tiempo del ensayo se reduce considerablemente de aproximadamente una hora a unos pocos minutos mediante el método RTF-EXPAR recientemente informado que utiliza un enfoque sin transcriptasa inversa (RTF) para la conversión de ARN en ADN seguido de EXPAR (reacción de amplificación exponencial) para amplificación a una sola temperatura. . La amplificación que tiene lugar a una sola temperatura es la clave de la velocidad, ya que evita los largos pasos de calentamiento y enfriamiento de la RT-PCR. Además, la sección de ADN que se amplifica es más pequeña en comparación con la RT-PCR. Por lo tanto, EXPAR genera hasta 108 hebras de producto de ADN en pocos minutos. La formación de dúplex se controla, como en el método de RT-PCR, utilizando colorante fluorescente, SYBR Green.
Curiosamente, el nuevo método se puede modificar para detectar varias otras enfermedades infecciosas causadas por virus de ARN, por ejemplo, Ébola, RSV, etc.
Fuentes):
Carter et al (2020). Detección de ARN de SARS-CoV-5 en menos de 2 minutos mediante una reacción de amplificación exponencial sin transcriptasa inversa, RTF-EXPAR. Preimpresión. Publicado en medRxiv Publicado el 04 de enero de 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
